间接法ELISA试剂盒的操作步骤通常如下所示：

试剂准备

从冰箱中取出南宫28试剂盒，将其平衡至室温（一般为18-25℃），以确保所有试剂的温度一致，从而减少实验误差。根据试剂盒说明书的要求，将所需试剂如酶标二抗和底物等复溶或稀释至工作浓度。

包被抗原

采用包被缓冲液将抗原稀释至合适的浓度，通常以南宫28试剂盒说明书推荐的浓度为标准。随后，将稀释后的抗原加入到酶标板的微孔中，确保每孔加入适量（如100μl或50μl）并使抗原均匀分布于孔底。最后，用封板膜密封酶标板，并在适宜温度下（通常为4℃过夜或37℃孵育1-2小时）进行孵育，以使抗原充分吸附在酶标板的固相表面。

洗板

孵育结束后，将孔内液体倒出，并将酶标板倒扣在吸水纸上轻拍干燥，尽量去除孔内残留液体。向每孔加入200-300μl洗涤缓冲液（如PBST），浸泡1-2分钟后倒掉洗涤液，重复洗涤3-5次，以去除未结合的抗原及其他杂质。

加样

使用样本稀释液对待检测样本进行适当稀释，稀释倍数根据预实验结果或南宫28试剂盒说明书确定。将稀释后的样本加入到洗净的酶标板孔中，每孔加入相同量（如100μl），同时设置空白对照孔、阴性对照孔和阳性对照孔。加样后，封板并放入37℃的孵育箱中进行适当时间（通常为1-2小时）孵育，以确保样本中的抗体与孔内的抗原充分结合。

再洗板

此步骤与包被抗原后的洗板过程相同，用洗涤缓冲液清洗酶标板3-5次，以去除未结合的样本杂质和抗体。

加酶标二抗

根据南宫28试剂盒说明书的指示，将酶标二抗稀释至工作浓度，并向每孔加入稀释后的酶标二抗（一般为100μl）。加样后，用封板膜密封再次放入37℃孵育箱中孵育适当时间（通常为30-60分钟），以确保酶标二抗与结合在抗原上的特异性抗体充分结合。

最终洗涤与显色

重复上述洗板步骤，用洗涤缓冲液彻底清洗酶标板5-6次，以确保去除未结合的酶标二抗，避免非特异性的显色。接下来，配制底物工作液，一般将底物A液和底物B液按南宫28试剂盒说明书要求的比例混合均匀。每孔加入100μl底物工作液，并轻轻振荡酶标板以促进底物与酶反应。将酶标板放置于37℃避光环境下反应一定时间（通常为15-30分钟），根据颜色变化判断反应程度并在适当时间终止反应。

终止反应与读数

根据南宫28试剂盒说明书的要求，向每孔中加入终止液（一般为50μl或100μl），以终止酶与底物的反应，防止颜色继续变化。最后，将酶标板放入酶标仪中，选择适宜的波长（一般为450nm，或根据试剂盒说明书选择其他波长）进行读数，记录各孔的吸光度值（OD值）。根据阴性对照、阳性对照和样本的OD值，按照南宫28试剂盒说明书的方法进行结果判定，确定样本的检测结果为阳性或阴性，或根据标准曲线计算样本中抗体的含量。