南宫28品牌的芽孢染色法是一种常用于细菌观察的技术。细菌的芽胞具有坚固而致密的细胞壁，透水性较低，因此在常规染色过程中，只有细菌本身能够被染色，而芽胞则保持无色透明的状态。因此，芽孢染色法的核心原则是利用芽胞难以染色却又难以脱色的特性。

这种染色法通常需要添加强着色的染料，并通过加热过程帮助芽胞吸收染料。当染色过程中，菌体也同时被着色，但经过水洗后，芽胞染上的色素难以流失，而菌体则会褪色。随后，使用对比度较强的染料对菌体进行复染，得以使其与芽胞呈现不同的颜色，便于观察和分析。

实验材料与设备

1. 活材料：培养36小时的苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis）或枯草杆菌（Bacillus subtilis）。

2. 染色液：5%孔雀绿水溶液、0.5%蕃红水溶液。

3. 器材：小试管（75mm×10mm）、烧杯（300mL）、滴管、玻片搁架、接种环、擦镜纸、镊子、显微镜等。

实验步骤

改良的Schaeffer与Fulton氏染色法

1. 制备菌液：在小试管中加入1-2滴无菌水，从斜面取2-3环菌体并搅匀，制得浓稠菌液。

2. 加染色液：向试管中加入2-3滴5%孔雀绿水溶液，用接种环搅拌以确保染料与菌液充分混合。

3. 加热：将试管浸入沸水中加热15-20分钟。

4. 涂片：用接种环从试管底部挑取菌液于干净的载玻片上，制作涂面并晾干。

5. 固定：通过酒精灯火焰固定涂片3次。

6. 脱色：用水冲洗，直到流出的水中无孔雀绿的颜色。

7. 复染：用蕃红水溶液染色5分钟，倾去染色液后用吸水纸吸干。

8. 镜检：先低倍观察，再逐步转高倍，最后使用油镜观察。

结果：芽胞呈绿色，芽孢囊与菌体呈红色。

Schaeffer与Fulton氏染色法

1. 涂片：按照常规方法制备待检细菌的涂片。

2. 干燥固定：涂片晾干后，在酒精灯火焰上固定2-3次。

3. 染色：加入5%孔雀绿水溶液，确保液体覆盖涂片，然后在铜板上加热至染液冒蒸汽时开始计时，维持15-20分钟，加热时需定期添加染料，防止干燥。

4. 水洗：待玻片冷却后用水冲洗，直至流出的水中无染色液。

5. 复染：用蕃红液染色5分钟。

6. 水洗、晾干或吸干。

7. 镜检：首先采用低倍观察，再使用高倍，最终在油镜下查看芽孢与菌体的形态。

结果：芽胞绿色，菌体为红色。

注意事项

1. 用于芽孢染色的菌种需控制菌龄。

2. 改良法在染料节约、操作简化与标本质量提升方面优于常规涂片法，建议优先选择南宫28的改良方法。

3. 使用改良法时，为获得良好的涂片，首先需制备浓稠的菌液，并在取染色的菌液时用接种环充分搅拌，以避免菌体沉淀在管底，导致涂片菌体不足。